?、偈箍乖蚩贵w結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。

　?、谑箍乖蚩贵w與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體,這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),把受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開,zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。

　　加入酶反應(yīng)的底物后, 底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,故可極大地放大反應(yīng)效果,從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。

　　人白介素ELISA試劑盒樣本處理及要求:

　　1、血清:室溫血液自然凝固 10-20分鐘,離心 20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn) /分)。仔細(xì)收集上清, 保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

　　2、血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左 右(2000-3000轉(zhuǎn) /分) 。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

　　3、尿液:用無菌管收集,離心 20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn) /分) 。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

　　4、細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn) /分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用 PBS (PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到 100萬 /ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn) /分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

　　5、組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的 PBS , PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS (PH7.4) ,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn) /分) 。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

　　6、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取, 提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于 -20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　7、人白介素ELISA試劑盒不能檢測(cè)含 NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP )活性。