PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒說明書

PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒是一種旨在通過使用PicoGreen熒光染料與樣品中雙鏈DNA的高度特異性結(jié)合而產(chǎn)生熒光信號來定量樣品中DNA含量的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、 成功實驗證明的。其適用于各種原核生物和真核生物的細(xì)胞或組織DNA以及環(huán)境中DNA含量分析。產(chǎn)品嚴(yán) 格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，高度敏感。

技術(shù)背景:

作為 DNA 染色劑之一的 PicoGreen 熒光染料特異性地與樣品中雙鏈 DNA 結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號。PicoGreen 技術(shù)可以檢測到低達(dá) 0.5 納克雙鏈 DNA 的變化。DNA 的微量增加引起熒光信號強(qiáng)度（Intensity）或相對熒 光單位（RFU）的顯著增加。其自發(fā)熒光（Autofluorescence）忽略不計，重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差異（Standard       Deviation） 低，不受樣品化學(xué)成分的干擾。

產(chǎn)品內(nèi)容：

染色液（Reagent A）  微升

稀釋液（Reagent B）  毫升

標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）  毫升

產(chǎn)品說明書 1 份

保存方式：

保存 染色液（Reagent A）和 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里， 染色液（Reagent A）避免光照，有效保證6個月

用戶自備1.5 毫升離心管：用于工作液配制的容器比色皿或 96 孔板：用于熒光分析的容器 熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀：用于熒光定量分析

PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒實驗步驟：

一、 測定準(zhǔn)備：

1．準(zhǔn)備好待測樣品，置于冰槽里

2．設(shè)定好熒光分光光度儀（溫度為 37℃）：激發(fā)波長 480nm，散發(fā)波長 530nm，并置零

3．實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的 染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出 xx 毫升 稀釋液（Reagent B）到新的 1.5 毫升離心管，加入 xx 微升 染色液（Reagent A），混勻后，用錫紙包裹，標(biāo)記為染色工作液，放在暗室里。然后進(jìn)行下列操作。

二、 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：

1．準(zhǔn)備好 5 個 1.5 毫升離心管，標(biāo)記為 1 至 5 號管

2．分別加入 xx 微升 稀釋液（Reagent B）到每個離心管

3．移取 xx 微升 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）到 1 號管，混勻

4. 小心移取 xx 微升 1 號管稀釋的 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）到 2 號管，混勻

5．小心移取 xx 微升 2 號管稀釋的 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）到 3 號管，混勻

6. 小心移取 xx 微升 3 號管稀釋的 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）到 4 號管，混勻

7．將 1 至 5 號管放進(jìn)冰槽里備用；標(biāo)準(zhǔn)管含量見下表：

8．移取 xx 微升含有 染色液（Reagent A）和 稀釋液（Reagent B）的 染色工作液到新的比色皿

9．加入 500 微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液

10．室溫下，孵育 5  分鐘，避免光照

11．即刻放進(jìn)熒光分光光度儀測讀：獲得相對熒光單位（Relative   Fluorescence    Unit；RFU）

12.重復(fù)實驗步驟 8 至 11 四次

13.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y  軸）為相對熒光單位（RLU）；橫坐標(biāo)（X  軸）為 DNA  含量（微克）

三、 樣品檢測

1．移取 xx 微升含有 染色液（Reagent A）和 稀釋液（Reagent B）的 染色工作液到新的比色皿

2．加入 500 微升待測樣品

3．室溫下，孵育 5 分鐘，避免光照

4.即刻放進(jìn)熒光分光光度儀測讀：獲得相對熒光單位（Relative   Fluorescence   Unit；RFU）

5．根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng) DNA 含量（微克）

6．樣品實際 DNA 濃度：

PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒注意事項：

1．本產(chǎn)品為 20 次（比色皿）和 100 次（96 孔板）操作，包括標(biāo)準(zhǔn)曲線測定

2．操作時，須戴手套

3．使用新鮮配制的 染色工作液，務(wù)必不要超過 2 小時，且注意避光

4．建議使用塑料管配制 染色工作液，而不是玻璃制品

5．孵育時，避免光照

6．系統(tǒng)檢測，標(biāo)準(zhǔn)曲線測定 1 次即可；如果儀器更換，則需要重新測定 1 次

7．如果熒光讀數(shù)過高，可以相應(yīng)稀釋樣品量

8．可以使用熒光酶標(biāo)儀檢測，試劑用量和體系均除以 5，包括標(biāo)準(zhǔn) DNA 含量，其計算公式[根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)DNA  濃度（微克）X樣品稀釋倍數(shù)]÷0.1（樣品容量；毫升）＝微克/毫升

9．鹽類、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白、瓊脂糖、單鏈 DNA 和 RNA 不會干擾檢測

10.本公司提供系列DNA檢測試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：

1．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定高度敏感

使用承諾:

上海滬崢秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定，保證 說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。